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当归和半枝莲对黄药子肝毒性的保护作用及机制研究.pdf
当归和半枝莲对黄药子肝毒性的保护作用及机制研究
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评估土壤污染生态风险的生物毒性归一化方法及其应用.pdf
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糖尿病对慢性重型病毒性肝炎临床转的影响分析.pdf
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TLR4对MHV-3诱导的C3H//He小鼠病毒性肝炎转的影响.doc
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构建靶向基因重组载体干预金属硫蛋白表达及其对鼻咽癌细胞毒性的影响.pdf
本文研究目的: 1.设计和合成靶向作用于人分子标靶MT功能基因的核酶序列片段,并构建其重组真核表达载体; 2.应用MT基因核酶重组质粒暂时性转染人鼻咽癌(NPC)细胞,介导有效的靶向基因表达抑制;此外,构建人MTcDNA重组真核表达载体,建立MT高表达细胞模型,为应用于毒理学和肿瘤化学干预中细胞毒性的研究提供方法和工具; 3.评价细胞内MT表达干预(抑制或诱导高表达)对NPC细胞转归的影响,了解细胞内MT表达与可诱导性细胞毒性和化学干预作用敏感性的关系。 研究方法: 1.靶向作用于人金属硫蛋白(MT)基因锤头核酶的设计和合成1.1靶向人MT基因锤头核酶的设计和分析:选择MT家族中MT1B和MT2A功能基因作为靶标,分别设计靶向特异性核酶序列MT-Rz及其串联核酶序列;同时设计突变体无活性核酶MT-mRz作为对照。利用Mfold在线分析软件进行二级结构预测。 1.2靶向人MT基因锤头核酶的合成:分别设计和合成靶向MT1B和MT2A功能基因核酶和突变核酶的特异性引物,PCR反应合成相应的核酶双链片段及其串联核酶片段。 2.靶向MT基因核酶、cDNA重组T载体和pCI-neo真核表达载体的构建。 2.1MT基因锤头核酶重组T载体的构建:目的核酶片段与T载体连接后,转化超感受态细胞,筛选阳性克隆扩增、抽提质粒。通过PCR扩增、限制性酶切和双向测序,鉴定目的核酶序列片段T载体克隆是否成功。 2.2靶向MT基因核酶pCI-neo重组真核表达载体的构建:将成功构建的重组T载体质粒双酶切,定向克隆构建目的核酶序列片段的pCI-neo重组真核表达载体,并测序确证。 2.3MT功能基因cDNA重组T载体和pCI-neo真核表达载体构建:抽提人鼻咽癌CNE1细胞总RNA,经RT-PCR获取人MT-1B和MT-2A功能基因cDNA片段,T克隆构建重组T载体并测序分析确证。将酶切获得的目的cDNA片段定向克隆,构建成MT功能基因cDNA的pCI-neo重组真核表达载体,并测序确证。 3.鼻咽癌细胞内MT基因表达的靶向干预及其对细胞毒性和转归的影响。 3.1靶向MT基因核酶重组真核表达质粒转染对NPC细胞内MT表达和细胞功能活性的影响。 3.2靶向MT基因cDNA重组真核表达质粒转染介导NPC细胞内MT高表达及其与细胞功能活性和转归的关
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单纯疱疹病毒性角膜炎内皮型药物治疗转的动态观察.pdf
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