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EGCG诱导人肝癌SMMC-7721细胞早期凋亡及其凋亡相关蛋白变化的研究.pdf
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【doc】人肝癌SMMC-7721细胞培养体会.doc
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茶多酚对人肝癌细胞株SMMC-7721的生物效应.pdf
目的:  通过茶多酚(TP)对人肝癌细胞株SMMC-7721作用,观察TP对细胞增殖影响、细胞形态学改变、细胞周期改变,确定TP对SMMC-7721细胞的剂量反应关系。  TP作用细胞后,测定细胞周期素D1(CyclinD1)蛋白表达量的改变,初步探讨激活蛋白1(AP-1)、P16与CyclinD1在信号传导通路中的作用,阐明TP对人肝癌细胞的分子作用机制。 方法:  本实验以体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721为研究对象,观察TP对人肝癌细胞的生物效应,(1)MTT比色法测定细胞增殖率,确定TP对人肝癌细胞的剂量反应关系。(2)苏木精-伊红(HE)染色法观察细胞形态学改变。(3)流式细胞仪检测细胞周期。  为进一步探讨TP作用人肝癌细胞株SMMC-7721的机理,(1)免疫细胞化学、灰度值分析比较,确定细胞CyclinD1和P16蛋白表达量改变。(2)构建AP-1报到质粒,以psv-β-gal质粒为内参照测量AP-1蛋白活性。 结果:  TP可抑制体外培养人肝癌细胞增殖,随着TP浓度增加,作用时间延长,细胞增殖率逐渐降低,其中48h内,25.0mg/L与50.0mg/L两剂量组增殖率差异有显著性(增殖率分别为94.12%和80.08%,t=4.011,P<0.01)。TP作用细胞后出现细胞凋亡改变,表现为细胞变小变圆,核染色质致密浓缩。在48h内随着TP浓度的增加,S期细胞从60.4%(0mg/L)降低到23.9%(100mg/L);G1期细胞从31.6%(0mg/L)上升到63.6%(100mg/L),细胞阻滞在G1期。  TP使CyclinD1蛋白表达降低,但P16蛋白表达没有影响,TP抑制细胞AP-1活性。 结论:  (1)TP抑制体外培养人肝癌细胞增殖,细胞出现凋亡改变,细胞阻滞在G1期,并呈剂量反应关系。  (2)TP抑制人肝癌细胞增殖,阻滞在G1期的可能机理:茶多酚通过抑制细胞AP-1活性,降低CyclinD1表达,细胞阻滞在G1期,从而抑制人肝癌细胞增殖。但CyclinD1蛋白表达降低与P16活性无关。
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Apr.2012.32(2)实验动物与 比较 医学 Laboratory Animal ComparativeMedicine 133 doi:10.3969/j.issn.1674—5817.20
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